微生物培养基的配制与灭菌需要注意的事项-新闻中心-中国标准品网

查询时请注意选择相应的产品编号

		微生物培养基的配制与灭菌需要注意的事项

　　发酵培养基主要是为了供菌种生长、繁殖和合成产物之用。培养基它既要使种子接种后能迅速生长，达到一定的菌丝浓度，又要使长好的菌体能迅速合成需产物。因此，发酵培养基的组成除有菌体生长所必需的元素和化合物外，还要有产物所需的特定元素、前体和促进剂等。但若因生长和生物合成产物需要的总的碳源、氮源、磷源等的浓度太高，或生长和合成两阶段各需的最佳条件要求不同时，则可考虑培养基用分批补料来加以满足。

　　操作方法和注意事项如下：加水，打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。装料、加盖，灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。排气，打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。标准样品

　　升压、保压和降压，当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。

　　灭菌后的培养基空白培养，灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。

　　细菌培养的基础是配制培养基牛肉膏蛋白胨培养基的配方然后再加热溶解，补足水分，其制作过程包括以下几个环节：①清洁玻璃器皿一般用肥皂液煮沸30 min,或用重铬酸钾和浓硫酸配制的溶液浸泡数10 min，然后用清水冲洗，晾干后保存备用。②配制液体培养基 a．根据需要配制培养基数量，先在烧杯中注入少量蒸馏水；b．按培养基配方称量各种成分的原料，依次使之溶解；c．补足需水量；d．如用牛肉膏、蛋白胨配制时，需加热熔化后溶解；e．加热后，补足水分即可。③配制固体培养基在液体培养基里加入一定量的琼脂，加热熔化即可。④调pH 先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基滴加1 mol/L 的NaOH溶液，边加边搅拌，并随时用pH试纸测pH,直到7.4～7.6为止。反之则用1 mol/L的HCl进行调节。⑤过滤分装用纱布趁热过滤，将滤液分装于试管中，其量约为试管体积的1/5（不要玷污管壁）。⑥加棉塞培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染；保证通气良好，加棉塞时，应使棉塞长度的2/3在试管口内。⑦包扎每10支试管用线绳捆成一捆，并且在管口外面包上一层牛皮纸，然后用线绳扎好。在每捆试管外挂上标签，注明培养基名称、配制日期和制作者姓名。

　　（2）灭菌高压蒸汽灭菌的效果是细菌培养的关键。具体操作如下：①打开高压灭菌锅，取出里面的灭菌桶，向锅内加水（最好用开水）水面与底架平齐为宜。②将扎好的试管管口向上，竖放在灭菌桶内，再将灭菌桶放回灭菌锅。注意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，否则会影响灭菌效果。③加盖，并将排气软管插入灭菌桶的排气槽内。以两两对称的方式，同时旋紧相对的两个紧固螺栓，以防漏气。④排出锅内的冷空气。⑤当锅内的压力上升到规定压力时，维持压力20 min，切断电源。⑥压力降至0以后，打开排气阀，排气完毕打开灭菌锅。

　　（3）搁置斜面如果要制作斜面培养基，将灭菌后的培养基冷却到50℃，每个试管带棉塞的一端搁在一根木棒上，使培养基形成斜面，斜面的长度不超过试管总长度的一半。

　　(4) 检验灭菌效果灭菌好的培养基在37℃培养箱中培养24h，检验灭菌效果。

　　培养基配制注意事项：注意营养物质的浓度比和C/N比。如:糖分含量要适合微生物生长才能良好,糖分过多则抑制微生物生长。一般微生物适宜C/N是25:1( 元素C/N的比值,也指培养基中还原糖的含量与粗蛋白质含量的比值)。

上一篇：环境保护部标准样品研究所网站标准样品购买		下一篇：标准品购买的过程中常见的一些问题解答